Zuverlässige (RT-) qPCRs direkt vom Sample

Wer qPCRs oder RT-qPCRs durchführt, kennt die Herausforderung: Inhibitoren können die Amplifikation beeinträchtigen, komplexe Proben führen zu variablen Ergebnissen und die Nukleinsäureaufreinigung kostet zusätzliche Zeit. Gleichzeitig steigen die Anforderungen an Sensitivität, Durchsatz und Multiplexing.

Mit den neuen Luna Direct Probe qPCR und One-Step RT-qPCR 4X Mixen erweitert New England Biolabs sein Luna-Portfolio um Lösungen, die sowohl mit aufgereinigten Nukleinsäuren als auch direkt eingesetzt werden können. Die erhöhte Inhibitortoleranz ermöglicht eine zuverlässige qPCR und RT-qPCR direkt aus anspruchsvollen Probentypen und unaufgereinigten Lysaten. Die konzentrierte 4X-Formulierung erlaubt einen höheren Probeninput und ermöglicht dadurch eine höhere Sensitivität für gering konzentrierte Targets. Dank leistungsfähigem Multiplexing lassen sich bis zu sechs DNA oder RNA Targets in einer einzigen Reaktion nachweisen.

Damit ermöglicht Luna Direct einfache, effiziente Workflows für vielseitige Einsatzmöglichkeiten in der Assay-Entwicklung, molekularen Diagnostik, Umweltanalytik und Forschung.

Direkt vom Sample in die Analyse

Die Extraktion und Aufreinigung von Nukleinsäuren kann viel Zeit in Anspruch nehmen und einen erheblichen Teil des Workflows ausmachen. Sie erhöht die Zahl der Arbeitsschritte und kann mit Nukleinsäureverlusten einhergehen. Mit Luna Direct eine direkte Amplifikation beispielsweise aus Vollblut, Abwasser, Plasma, Fäzeslysaten oder Pflanzenmaterial erfolgen.

Abb. 1: Zuverlässige Amplifikation aus einer Vielzahl gereinigter und direkt eingesetzter Proben

Die Performance des Luna Direct Probe qPCR 4X Master Mix with UDG wurde in 20 µl Reaktionen mit Targets aus Humanblut, Abwasser, Mais und humanen Fäzes untersucht.
Gereinigte DNA: 50 ng bis 50 pg aus K2 EDTA Humanblut; 300 ng bis 30 pg aus Abwasser; 50 ng–5 pg aus Mais; 100 ng bis 10 pg aus humanen Fäzes.
Direkte Proben: 10, 15 und 20 % K2 EDTA Humanblut; 10, 20 und 40 % Mischabwasser; 2,5 % Maisblattlysat; 5 % Lysat aus humanen Fäzes.

Die erhöhte Inhibitortoleranz ermöglicht eine zuverlässige Amplifikation sowohl aus aufgereinigten Nukleinsäuren als auch aus unaufgereinigten Lysaten und inhibitorreichen Proben. Damit eignen sich die Luna Direct Mixe für Direct-from-Sample-Workflows, bei denen auf eine umfangreiche Nukleinsäureaufreinigung verzichtet werden kann.

Mehr Input für eine sensitive Detektion niedrig abundanter Targets

Gerade bei niedrig konzentrierten Targets kann die verfügbare Probenmenge entscheidend sein. Die konzentrierte 4X-Formulierung von Luna Direct ermöglicht einen höheren Probeninput und unterstützt damit die Detektion niedrig abundanter Targets.

Mit kurzen Cycling-Protokollen schneller zu qPCR-Ergebnissen

Mit Extensionszeiten von nur 10 Sekunden unterstützen die Luna Direct Mixe schnelle Cycling-Protokolle. Das kann die Zeit bis zum Ergebnis verkürzen und trägt dazu bei, qPCR- und RT-qPCR-Workflows effizienter zu gestalten.

Carryover-Kontaminationen vorbeugen

Die Luna Direct Mixe enthalten bereits thermolabile UDG und dUTP und reduzieren das Risiko von Carryover-Kontaminationen. Damit ist die Kontaminationsprävention direkt in die Reaktionschemie integriert.

Mehr Sicherheit beim Pipettieren

Ein sichtbarer blauer Tracking Dye erleichtert die visuelle Kontrolle beim Pipettieren und kann so helfen, Pipettierfehler zu minimieren. Der Farbstoff ist so ausgelegt, dass er die Detektion nicht beeinträchtigt.

Mehr Flexibilität für unterschiedliche qPCR-Plattformen

Für Geräte, die keinen passiven Referenzfarbstoff benötigen, stehen die Luna Direct Mixe auch ohne ROX zur Verfügung. Dadurch bleiben mehr optische Kanäle verfügbar und es entsteht zusätzliche Flexibilität für das Design von Multiplex-Assays.

Das Luna Direct Portfolio von New England Biolabs umfasst Produkte für DNA-basierte qPCR sowie für die One-Step RT-qPCR:

• NEB# M3052: Luna Direct Probe One-Step RT-qPCR 4X Mix with UDG
• NEB# M3053: Luna Direct Probe One-Step RT-qPCR 4X Mix with UDG (No ROX)
• NEB# M3055: Luna Direct Probe qPCR 4X Master Mix with UDG
• NEB# M3056: Luna Direct Probe qPCR 4X Master Mix with UDG (No ROX)

Sind Sie bereit für einen direkten qPCR-Workflow?
Entdecken Sie Luna Direct und testen Sie die Performance mit Ihren eigenen Proben.
Weitere Informationen sowie kostenfreie Testmuster finden Sie hier!